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[生物学]基因工程第二章 DNA重组的克隆操作.ppt
[生物学]基因工程第二章 DNA重组的克隆操作2 dna重组的单元操作

基 因 工 程 gene engineering

基因工程载体必需具备的4个基本条件 具有对受体细胞的可转移性或亲和性,以提高载 体导入受体细胞的效率。 具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位 点。

具有多种单一限制性内切酶位点。
具有合适的选择标记基因。

基 因 工 程 gene engineering

2.1 dna重组的载体
2.1.1 质粒载体
一、质粒的一般生物学特性
(一)质粒dna的分子特性

1、自主复制性
已知的绝大多数质粒都是双链闭合环状dna分子。除了酵 母的杀伤质粒是一种rna分子外,其他已知的所有质粒无 一例外地都是dna分子。 质粒dna分子 的三种构型 闭合环状dna(ccdna),即sc构型 开环dna(ocdna),即oc构型

线形dna(ldna),即l构型
基 因 工 程 gene engineering

2、可扩增性
严紧型质粒:在宿主细胞中的拷贝数较少,一般只有1~3个 松驰型质粒:其拷贝数较多,一般20~60个,多的可达 200~300个 。

3、质粒的不相容性
质粒的不亲和性(也称为不相容性):是指在没有选择压力 的情况下,两种不同质粒不能在同一个宿主细胞中稳定共存 的现象。

在细胞增殖过程中,其中必有一种会被逐渐稀释、排斥掉, 这样的两种质粒称为不亲和质粒。
基 因 工 程 gene engineering

4、质粒的转移性
结合型质粒(conjugative plasmid)又叫自我转移型质粒,其 分子量一般都比较大,除携带自主复制所必需的遗传信息外, 还带有一套控制细菌配对和质粒接合转移的基因,因此能从一 个细胞自我转移到另一个细胞中。 非接合型质粒(nonconjugative plasmid)又叫不能自我转移型 质粒,其分子质量较小,虽然携带自主复制所必需的遗传信 息,但不携带控制细菌配对和质

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