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皮肤恶性黑素瘤是一种高度恶性的皮肤肿瘤,其发病机制尚未阐明,目前已明
确存在多个异常信号转导途径。c-KIT为原癌基因c.KIT编码的受体酪氨酸激酶家
族成员,其活化与多种恶性肿瘤的发生、发展和转移均有关。甲磺酸伊马替尼可选
择性抑制c—KIT、c—ABL、PDGFR等酪氨酸激酶,从而发挥抗肿瘤作用。近期国外
研究发现在黑素瘤中存在c.KIT基因的活化性突变,本研究旨在探讨c.KIT在我国
黑素瘤发病机制中的作用,并探讨甲磺酸伊马替尼对体外培养黑素瘤细胞增殖和凋
亡的影响。
第一部分皮肤恶性黑素瘤c.KIT蛋白表达和e-KIT基因突变研究
目的:探讨皮肤恶性黑素瘤和色素痣中c.KIT蛋白的表达以及黑素瘤组织中
c.KIT基因和BRAF基凶的突变情况。
方法:采用免疫组化方法分析24例原发性皮肤黑素瘤、4例转移性黑素瘤及
20例良性色素痣组织中c.KIT的表达情况,采用PCR扩增和直接测序检测22例皮
肤黑素瘤c.KIT基因11号、13号外显子突变和BRAF基因15号外显子突变。
结果:原发性皮肤黑素瘤c.KIT阳性表达率(88%)明显高于色素痣(55%)
和转移性黑素瘤(25%),阳性表达位于细胞膜和细胞质。在肢端黑素瘤(2/15)
和慢性光损伤部位黑素瘤(1/3)中存在c.KIT基因突变(L575P和K642E),肢端黑素
瘤(2/15)和非慢性光损伤部位黑素瘤(2/2)存在BRAF基因突变(V600E)。肿瘤
中未见c—KIT和BRAF基因突变共同存在。
结论:c.KIT蛋白在原发性皮肤黑素瘤表达明显升高,c.KIT基因在部分原发性
肢端和慢性光损伤部位黑素瘤存在突变,提示c.KIT在黑素瘤的发病机制中起一定
作用。
第二部分甲磺酸伊马替尼对黑素瘤细胞c.KIT表达及增殖的影响
目的:探讨甲磺酸伊马替尼对体外培养黑素瘤细胞系c.KIT表达及细胞增殖的
影响。
方法:采用免疫细胞化学和Western印迹法检测人黑素瘤M14细胞和小鼠黑素
瘤B16F10细胞中c—KIT的表达,MTT法分析51xmol/L、10}tmol/L、209mol/L三种
浓度甲磺酸伊马替尼对M14细胞和B16F10细胞生长抑制作用,Western印迹法观
察M14细胞c.KIT蛋白和P.c.KIT蛋白的表达情况。
结果:c.KIT在M14细胞表达,在B16F10细胞中无表达;5}
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