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J6AbstractSingle-NucleotidePolymorphisms(SNPs)arethemostabundantformofgeneticvariations.Inthisstudy,
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重组腺相关病毒/人凝血因子基因无创途径基因治疗血友病B的安全性研究.pdf
血友病B是一种FIX基因缺陷所致的X连锁隐性遗传性出血性疾病,基因治疗是唯一能治愈此病的方法。目前世界上主要给药方式均为有创,而以肠上皮细胞为靶细胞,通过灌肠给药,则避免了有创的治疗方式。本实验室前期实验已经证实,重组腺相关病毒载体/人凝血因子IX(rAAV2/hFIX)可体外转染肠上皮细胞并能够表达具有生理活性的hFIX;同时,体内实验中我们亦证明了rAAV2/hFIX能够转染肠上皮细胞并能够表达具有生理活性的hFIX。 目的:系统地检测结肠灌注rAAV2/hFIX基因治疗血友病B的安全性,为进一步的临床实验提供了基础。 方法:本实验以rAAV2/hFIX按1×10<´13>v.g/kg的剂量结肠灌注给昆明小鼠/血友病B小鼠实验组小鼠,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测小鼠血浆中的抗rAAV2抗体,改进型Bethesda法检测小鼠血浆中的中和抑制性抗体(抗hFIX抗体),采用PCR技术以及免疫组化检测hFIX目的基因在实验组小鼠的心,肝,脾,肺,肾,结肠,脑,卵巢组织中的分布,行局部病理切片,了解结肠黏膜的病理改变。 结果:1.rAAV2/hFIX灌肠后,第14天昆明小鼠血浆中能够检测出rAAV2的IgG抗体;第21天达到峰值,为(10.05±0.80);此后逐渐下降,第35天,IgG抗体水平仍是灌肠前的3倍左右;血友病B小鼠的血浆中第14天和21天分别为(8.30±0.80)和(9.40±0.60),与昆明小鼠的IgG抗体水平相当。2.rAAV2/hFIX灌肠后,第7天实验组昆明小鼠血浆中可检测到小鼠血浆中的中和抑制性抗体(抗hFⅨ抗体);第14天达到峰值,为(19.3±1.8)B.U/ml;此后迅速下降,但是到第28至35天中和抑制性抗体(抗hFⅨ抗体)水平下降速度趋缓,仍然有7-8 B.U/ml左右。3.实验组血友病B小鼠的心,肝,脾,肺,肾,结肠,脑,卵巢组织DNA经PCR扩增后,其产物电泳结果显示:在结肠组织所在的泳道中可见约183bp的DNA条带,DNA测序分析显示,在结肠组织中确实含有hFIX基因,但其他组织未扩增出hFⅨ基因。在灌肠后第21天血友病B小鼠实验组免疫组化检测镜检显示:结肠黏膜下层被染成深棕色,黏膜层不明显。4.在灌肠后第21天血友病B小鼠实验组HE染色玻片
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复旦大学博士学位论文重组慢病毒载体介导的人凝血因子的表达及宫内基因治疗研究姓名:陈晓光申请学位级别:博士专业:遗传学指导教师:薛京伦20030430复旦大学博士学位论文重组慢病毒载体介导人凝血Ix因子
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国家海洋局第三海洋研究所硕士学位论文对虾白斑综合症病毒极早期基因WSV083和南美白对虾信号传导与转录激活因子的研究 Characterization whitespot syndrome virus
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