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论文分类号R392-33 重组人促卵泡激素的纯化及鉴定Purification RecombinantHuman Follicle Stimulating Hormone 作者姓名:刘 业:生物化学与
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重组低分子量促红细胞生成素的构建、表达与性质鉴定.pdf
基于对促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)结构和功能的认识,通过基因工程方法改造EPO分子,删除其促红细胞增殖功能结构域,降低分子量,保留其神经保护功能结构域。同时在改造后的EPO分子的N-端融合特异穿透血脑屏障的小肽。由此,本文构建了一种新型的具有神经保护功能的重组低分子量促红细胞生成素rEPOm,并利用原核表达系统,实现了高效表达和纯化。 重组低分子量促红细胞生成素rEPOm在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高水平表达,同时以可溶形式和包涵体形式表达。将可溶表达的重组蛋白rEPOm进行镍柱亲和纯化;将包涵体形式表达的rEPOm蛋白通过使用分子筛进行凝胶过滤变复性纯化,都获得了目的蛋白rEPOm的初纯产物。通过免疫印迹法证明该诱导表达及纯化的蛋白为目的蛋白。并使用SD乳鼠CGNs细胞建立凋亡模型对纯化后rEPOm的活性进行检测,证实了重组rEPOm具有与rhEPO类似的神经保护活性,有望成为一种新型的神经保护剂分子,但仍然需要进一步的体内体外实验继续验证。
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