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BrdU标记的HCMV感染HEL细胞、大鼠脑组织和U<,251>细胞的研究.pdf
- 目的(1)以标记在人巨细胞病毒(HCMV)DNA 上的BrdU为示踪剂，研究HCMV在HEL细胞中的移动规律；同时结合HCMV蛋白IEl及pp65的分布及表达特点探讨病毒复制增殖的过程。(2)建立BrdU标记HCMV感染SD大鼠脑组织的模型；探讨大鼠CNS神经元对HCMV的容许性，受染细胞数与病毒感染量和感染时间的相关性。(3)研究U<,251>细胞对HCMV的容许性，并探讨病毒蛋白IEl及pp65的分布及表达特点。 方法(1)以BrdU标记HCMV DNA，测定其PFU值；以MOI=4的病毒量感染HEL细胞，分别在2h p.i.、4h p.i.、6h p.i.、8h P.i.、12h p.i.、24h p.i.及48h p.i.时用抗BrdU单克隆抗体进行免疫细胞荧光染色；分别用抗HCMV蛋白IEl及pp65单克隆抗体进行免疫细胞化学染色；运用图像分析系统对免疫细胞化学染色结果进行灰度值测定，经统计分析探讨此两种蛋白的分布及表达特点。(2)将15只SD大鼠随机分为病毒感染组(12只)及对照组(3只)，病毒感染组根据感染时间分为三组：24h p.i.、48h p.i.及96h p.i.，每个感染时间组再分为2μl及4μl两个剂量组，均以脑内注射途径将BrdU标记的HCMV(MOI=4)直接注入大脑海马部位；每个感染时间组设立一只阴性对照，于同一部位注入不含病毒的细胞培养上清液(4μl)；术后分笼饲养，于各感染时间点处理鼠取脑，经固定、浸糖处理后冰冻切片，应用抗BrdU单克隆抗体及抗MAP<,2>单克隆抗体的混合抗体对海马周围部位脑片进行免疫荧光双标染色，应用抗病毒蛋白pp65单克隆抗体进行免疫组化染色及Nissil复染。(3)HCMV感染U<,251>细胞，于15min p.i.、30min p.i.、1h p.i.、2h p.i.、4h p.i.、6h p.i.、8h p.i.、10h p.i.、12h p.i.、14h p.i.、24h p.i.、48h p&
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向豆丁求助：有没有BrdU标记及染色实验方案?
