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琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物.ppt
- 1. 实验目的。2. 实验原理。5. 实验结果及讨论。实验目的。实验原理。凝胶电泳是分离和纯化DNA片段最常用的技 术。根据制备凝胶的材料，分为琼脂糖电泳 和聚丙烯酰胺电泳。。?。?。琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，沸水中溶解， 45℃ 开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小决 定于琼脂糖的浓度。。?。DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用 下向正极泳动。DNA分子的迁移速度与相对分子质 量的对数成反比。。? 琼脂糖是一种线性多糖聚合物。 ? 浓度越高，孔隙越小，其分辨能力就越强。。琼脂糖浓度(%)。线型DNA分子的分离范围 (Kb)。0.6。1～20。1.2。0.9～6。?。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分 子筛效应。不同的DNA，分子量大小及构型不同， 电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。。?。琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，是利用分子筛效应， 迁移速度与分子量的对数值成反比关系，可依据 DNA分子的大小使其分离。该过程可以通过把分子 量标准参照物和样品一起进行电泳而得到检测。。? 溴化乙锭在紫外光照射下能发射荧光，当。DNA样品在琼脂糖凝胶中从负极向正极泳动。注意事项：。环境。 ? 实验过程中操作要保持安静、镇定，注意样 品不能污染。。实验仪器、材料与试剂。（二） 材料。（三） 试剂。TAE电泳缓冲液(50×) （pH8.0） Tris 242g 冰醋酸 57.1ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 100ml ? 3. 溴化乙锭溶液 10mg/ml水溶液，室温，棕色 瓶或铝铂纸包装保存。 ? 4. 10×DNA样品上样缓冲液。核酸染色剂。是一种荧光染料，EB分子可嵌入核酸双链的碱基对之间， 在紫外线激发下，发出红色荧光。其荧光强度与DNA的含 量成正比。据此可粗略估计样品DNA浓度。 琼脂糖凝胶EB染色，肉眼可见核酸电泳带，。
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